Клеточных механизмов гомеостаза крови

Заведующий лабораторией

Миндукшев Игорь Викторович, д.б.н.

Основные направления исследований

— Внутриклеточная и межклеточная сигнализация клеток крови;

— Молекулярные механизмы трансформации и программированной гибели безъядерных клеток крови (тромбоцитов и эритроцитов). Условия и механизм образования микрочастиц;

— Действие противоопухолевых препаратов различной природы на клеточное звено гемостаза;

— Развитие новой технологии клеточного анализа, основанной на использовании метода малоуглового светорассеяния в кинетических исследованиях;

— Нарушение функций тромбоцитов при воспалительных процессах;

— Фармакологическое тестирование новых препаратов на клеточных моделях in vitro (тромбоциты и эритроциты).

Достижения

Исследования в области протеомики тромбоцитов. Совместно с университетами Германии и Великобритании (5 университетов) проведены широкомасштабные протеомные исследования тромбоцитов. В этих клетках идентифицировано более 5000 белков, большая часть которых (4000 белков) составляют менее 1% от общего содержания белков.  Определена структурная и/или функциональная роль белков тромбоцитов (цитоскелет, мембранные рецепторы или каналы, гранулы, внутриклеточная сигнализация, метаболизм и пр.). По содержанию копий белка на клетку представлено распределение основных белков клетки (Top 100, 200, 500 proteins). В отличие от других клеток организма, тромбоциты имеют ряд отличительных признаков, отражающих их высокую лабильность: а) клетки содержат более 70 типов рецепторов; б) более 50% от общего содержания представлено цитоскелетными белками; в) высокое содержание белков гранул (8%). Количественный протеомный анализ здоровых доноров показывает, что, несмотря на высокую биологическую дисперсию между людьми, формирование тромбоцитов от мегакариоцитов является строго регуляторным и воспроизводимым процессом, лишь незначительно различающим в паттернах экспрессии белка. Основной аспект наших исследований был акцентирован на пост-трансляционной модификации белков, а именно на их фосфорилировании, как основной реакции, предопределяющей трансформацию клеток. В тромбоцитах картировано около 6000 сайтов фосфорилирования.  В условиях цАМФ зависимой РКА стимуляции тромбоцитов илопростом, из 2700 анализируемых фосфопептидов, фосфорилируется почти 300 белков, из которых 137 являются мишенями РКА (протеинкиназа А). Эти данные показывают, что цАМФ-зависимое ингибирование предполагает перекрестное взаимодействие ряда сигнальных путей, в котором принимают участие, по крайней мере, 16 киназ и 7 фосфатаз, и является гораздо более сложным, чем первоначально предполагалось. В условиях перекрестной стимуляции активирующих и ингибирующих сигнальных систем тромбоцитов, из картированных 4797 пептидов фосфорилируются 608 пептидов, причем для ряда этих белков еще не установлена их ролевая функция. Результаты и аналитическая стратегия протеомных методов исследования тромбоцитов позволяет выявлять белковые диагностические маркеры и мишени терапевтического воздействия, и является основой для разработки методологии персонализированных протоколов лечения сердечнососудистых заболеваний, связанных с нарушением тромбоцитарных функций.

рис 3

From Burkhart JM, Gambaryan S, Watson SP, Jurk K, Walter U, Sickmann A,. Heemskerk JWM, Zahedi RP. What Can Proteomics Tell Us About Platelets?
2014. Circ Res. 114:1204-1219. PMID
: 24677239

Исследование апоптоза тромбоцитов и эритроцитов. Проведены сравнительные исследования внутриклеточных механизмов гибели тромбоцитов после их активации. Установлено, что в первые минуты активации тромбоцитов агонистами (тромбин/конвульксин) наблюдается как увеличение прокоагулянтной активности (активация интегринов αIIbβ3), так увеличение проапоптатических факторов (генерация реактивных форм кислорода ROS, экстернализация фосфатидилсерина PS, аккумуляция церамида, повышение [Са2+]i). Апоптоз активированных тромбоцитов наступал существенно позднее и не сопровождался активацией каспазы 3, несмотря на высвобождение цитохрома С из митохондрий. В то время как, ингибитор антиапоптотических белков Bcl2 (АВТ-737) вызывал каспаз-зависимый апоптоз тромбоцитов (экстернализация PS, падение митохондриального потенциала, освобождение цитохрома С, активация каспазы 3), и не сопровождался увеличением продукции ROS, [Са2+]i и церамида.

Уточнены механизмы и особенности развития апоптоза эритроцитов и тромбоцитов в условиях действия оксида азота (NO). Анализ сравнительных исследований окисления гемоглобина и трансформации эритроцитов при действии трет-бутилгидроксипероксида (tBH) и нитрозоцистеина (SNC) позволил заключить, что именно образование гемихрома, является необходимым условием развития апоптоза эритроцитов, связанным с окислением гемоглобина. SNC (как источник NO) вызывает образование только мет-гемоглобина, без последующего развития апоптоза. В то время как, пероксид (tBH) окисляет гемоглобин до гемихрома, и вызывает экстернализацию фосфатидилсерина, активацию каспазы 3, кластеризацию белка полосы 3, образование микрочастиц.

Активация тромбоцитов приводит к вовлечению клеток в тромбообразование и/или к развитию у них апоптоза. Внутриклеточная сигнальная система: NO – sGC (растворимая гуанилатциклаза) – cGMP, играет ключевую роль в ингибировании этих процессов. Экстернализация фосфатидилсерина и образование микрочастиц, индуцированное комбинированным действием тромбин/конвульксином, ингибируется NO только по cGMP-зависимому механизму. В то время как падение потенциала (∆Ψm) ингибируется NO при низких концентрациях по cGMP-зависимому механизму, а при высоких концентрациях NO — по cGMP-независимому механизму.

Развитие новой технологии на основе метода малоуглового светорассеяния. Приоритетным направлением является разработка и серийное производство лазерных анализаторов частиц, основанных на технологии малоуглового светорассеяния. Экспериментальная установка для исследований суспензии клеток методом малоуглового светорассеяния была создана Деркачевым Э.Ф. и Миндукшевым И.В.  в 1993г. в ИЭФБ РАН. Концепция установки и далее разработанных приборов является оригинальной, отличительной особенностью которой, является совмещение технологии Лазерных Анализаторов Частиц (Laser Particle Analyser) с возможностью проведения кинетических исследований трансформации клеток. Была разработана оригинальная система перемешивания. Важным фактором этой системы перемешивания было достижение высокой вероятности столкновения тромбоцитов в условиях их низкой концентрации, и при этом клетки не активировались под воздействием сдвигового напряжения.  Был разработан новый способ исследования активации и агрегации тромбоцитов (Патент RU 2108579 C1 6 G01 N 33/49. 1998), позволяющий различать все стадии трансформации тромбоцитов: изменение формы клеток (shape change), агрегация, дезагрегация, образование тромба (clotting).  На основе этих разработок была создан прототип прибора. Принцип прибора основан на кинетическом измерении трансформации клеток (размеров и форм) при их функциональном воздействии, технологией малоуглового светорассеяния. В дальнейшем разработка велась параллельно в двух организациях: в ООО «ЛЮМЭКС» в проектно-производственном отделе №10 (руководитель Миндукшев И.В.) прототип прибора был доведен до серийно выпускаемых анализаторов серии «ЛАСКА» (ЛАСКА-1К и ЛАСКА-2К) и в ИЭФБ РАН (группа Миндукшева И.В.)  разрабатывалась методология применения анализатора для клеточного анализа тромбоцитов и эритроцитов. Анализаторы серии «ЛАСКА» успешно работает в более 50 организациях в России и за рубежом.  Апробация прибора и новых цитологических методов исследования форменных элементов крови (тромбоцитов, эритроцитов) проходила в более 15 исследовательских лабораториях медико-биологического профиля России, Германии, США: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.И.П.Павлова; НИИ гигиены, профпатологии и экологии человека ФМБА России; НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАМН; Новосибирский ГМУ; Волгоградский ГМУ; Институт биофизики клетки (г.Пущино);  ГУ «Гематологический научный центр РАМН»; Institute of Clinical Biochemistry, Wuerzburg, Germany;  Department of Physiology Louisiana State University, Health Sciences Center  Shreveport LA, USA. По материалам, полученным с использованием новых методов, реализованных на анализаторе «ЛАСКА», защищено более 15 кандидатских и 3 докторских диссертаций. Опубликовано более 80 научных публикаций в России и за рубежом

Перспективы

Исследование механизмов действия противоопухолевых препаратов на активацию и/или апоптоз тромбоцитов человека. Планируется исследовать реакции тромбоцитов на действие противоопухолевых препаратов (АВТ-737, госсипол, тимокинон). В качестве маркеров апоптоза будут измеряться фосфатидилсериновая эктернализация, изменения мембранного потенциала в митохондриях и активность каспазы 3 с использованием флуоресцентных маркеров, таких как Аннексин V, JC-1 и флуоресцентных антител методом проточной флюоцитометрии (Beckman Coulter). Параллельно, с использованием иммунохимического метода (Western Blot), будет оцениваться активность белков, участвующих в апоптозе (BAK, BAX, Bcl-XL, Bcl-2, Bclw, Bim, Bid). Планируется исследовать влияние противоопухолевых препаратов на активацию тромбоцитов, определяемую двумя основными процессами: изменением формы (shape change) и агрегацией.  Для исследования этих процессов будет использован разработанный метод малого углового светорассеяния. Выброс гранул на поверхность тромбоцитов (дегрануляция) и изменение конфирмации основного тромбоцитарного интегрина αIIbβ3. будут регистрироваться методом проточной флюоцитометрии (Beckman Coulter). Иммунохимическим методом с использованием фосфоантител, выработанных против определенных сайтов белков, будут определиться активности белков, таких как протеинкиназа С и В, р38, ERK, MAP -киназы, общая активность тирозинкиназ.

Исследование различных условий, вызывающих образований микрочастиц эритроцитов, и выявление механизмов такого формирования. Планируется отработка нескольких моделей,  позволяющих проследить кинетику трансформации эритроцитов и изменение статуса этих клеток при различных воздействиях (условиях), вызывающих (возможно) образование микрочастиц эритроцитов, таких как: I) повышение внутриклеточной концентрацией ионов кальция при действии кальциевого ионофора А-23187; II) инициирование  окислительного стресса различными способами (трет-бутил гидроксипероксид, фенилгидразин и диамин); III)  сшивка поверхностных белков при действии амино-реактивных кросслинкеров -BS3.  В каждой модели будут исследоваться: 1) характеристика субпопуляций эритроцитов/микрочастиц по параметрам прямого и бокового светорассеяния — методом проточной цитометрии, 2) спектральная характеристика  форм гемоглобина: RHb, HbO2, MetHb, HbChr, 3) маркерные реакции апоптоза эритроцитов: экстернализация фосфатитилсерина и активация каспазы 3 (проточная цитометрия),  4) оценка витальности клеток по связыванию с кальцеином-АМ, 5) изменение поверхностных свойств клеток: по связыванию эозин-5-малеимида —  маркер кластеризации белка полосы 3,   экспрессии гликопротеина CD47  — лиганд рецептора SIRPA, гликофорин А — CD235a (маркировка микрочастиц), 6) деформационно-функциональные характеристики эритроцитов с использованием тестов  на осмотическую и аммонийную нагрузку, 7) визуализация морфологических изменений эритроцитов (конфокальная микроскопия).

Исследование возможности вовлечения тромбоцитов и эритроцитов в генерацию NO, регулятором, вызывающим вазодилатацию сосудов и ингибирование тромбоцитов. Понимание молекулярных механизмов действия внутриклеточной сигнальной системы NO/sGC/cGMP/PKG очень важно для модуляции гипоксической вазодилатацию сосудов и ингибирования агонист-опосредованных тромбоцитарных ответов. В ряде статей показано присутствие и обоснована функциональная роль синтазы окиси азота (NOS) в тромбоцитах (Gkaliagkousi et al, 2007) и эритроцитах (Kleinbongard  et al, 2006). Однако, как по нашим данным (Gambaryan, et al, 2008; Böhmer et al, 2013), так и других исследователей (Ozuyaman et al, 2005)  в тромбоцитах не присутствует  ни одна из  изоформ фермента NOS. Аналогично, под большим вопросом происходит ли экспрессия NOS в эритроцитах (Böhmer et al, 2012). Разрешение этих вопросов очень важно, как для понимания молекулярных механизмов, так и модуляции (в т.ч. терапевтической) процессов ответственных за гипоксическую вазодилатацию.

Совместные с Санкт-Петербургской клинической больницей РАН исследования, направленные на внедрение в клиническую практику новых методов оценки функционального состояния клеток крови (тромбоциты, эритроциты). Состояние клеток будет исследоваться современными технологиями светорассеяния и флуоресценсии на лазерном анализаторе LaSca-TM, (созданного сотрудниками лаборатории), проточного цитометра (Navios, Beckman Coulter) и Western Blot. Данные исследования позволят выявлять и диагностировать ранние нарушения сердечно-сосудистой системы (тромбозы, нарушения свертываемости крови), а также реакцию пациентов на препараты с антитромботическим и антикоагуляционным действием.

Эволюционное направление исследований. Исследование структуры и функции ядерных эритроцитов и тромбоцитов низших позвоночных и птиц. Планируется наладить методы исследования клеток крови методом малоуглового светорассеяния, исследования механизмов агрегации тромбоцитов в потоке, морфологические исследования тромбоцитов и эритроцитов при различных воздействиях.

 Используемые экспериментальные подходы

Метод малоуглового светорассеяния. Кинетические исследования трансформации клеток проводится на лазерном анализаторе «LaSca-TM» (ООО «БиоМедСистем» С.Петербург), позволяющем регистрировать: изменение объема и формы клеток, агрегация, агглютинация, образование микрочастиц, лизис. Разработаны и используются новые методы оценки форменных элементов крови: 1) метод оценки функциональной активности тромбоцитов (Патенты RU №2108579 1998; RU № 2008153058 2010); 2) метод оценки деформационно-функциональных свойств эритроцитов.

рис4

Лазерный анализатор «LaSca-ТМ»

Проточная цитометрия. Проточный цитофлуориметр Navios (Beckman Coulter, США).

1)  Изменение конформации тромбоцитарного интегрина aIIb3 — по связыванию меченого флуоресцентной меткой фибриногена;

2) выброс гранул на поверхность тромбоцитов (дегрануляция) — по связыванию Р-селектина;

3) мембранный потенциал митохондрий — JC1;

4) активные формы кислорода — DCFH-DA;

5) эктернализация фосфатидилсерина — PE, FITS-конъюгированный аннексин-V;

6) активность каспазы 3.  Регистрация внутриклеточной концентрации ионов кальция с использованием кинетического режима по флюоресценции Fluo3-AM. В эритроцитах кластерезация полосы 3 (AE1-обменник) — по флуоресценции эозин-5-малеимида (ЕМА); эстеразная активность — calcein-AM.

Вестерн-блот анализ. Активация внутриклеточных белков. Иммунохимическим методом с использованием фосфоантител, выработанных против определенных сайтов белков: протеинкиназа С, протеинкиназа В, р38, ERK-, MAP-киназы, общая активность тирозинкиназ. Активность белков, участвующих в апоптозе: каспаза-3 и Bcl-2 белки. Активация протеинкиназ A и G (PKA и PKG) по фосфорилированию VASP (Vasodilator-stimulated phosphoprotein): сайт Serine157 – PKA, сайт Serine259 — PKG. Для проведения Вестерн-блота электрофорез белков клеток проводится в SDS полиакриламидном геле (PAGE) с последующей хемилюминесцентной регистрацией белков, меченных антителами (Amersham, Pharmacia Biotech).

Гематологический анализ клеток крови. Основные параметры отбираемой крови и суспензии клеток (концентрация и объем) контролируется на гематологическом анализаторе Medonic-M20 (Boule Medical A.B., Швеция). Спектроскопия: спектр гемоглобинов анализируется на сканирующем спектрофотометре СПЕКС ССП-715-М (ООО «Спектроскопические системы» РФ).

Сотрудничество

  • Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова;
  • Санкт-Петербургский государственный университет;
  • Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого;
  • НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта (Санкт-Петербург);
  • ФГБУН Институт морских биологических исследований им. А.О. Ковалевского РАН;
  • Centre for Thrombosis and Hemostasis, Johannes Gutenberg University Medical Centre Mainz, Germany;
  • Institute of Experimental Cardiovascular Research, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany;
  • Institute of Clinical Biochemistry and Pathobiochemistry, University of Wuerzburg, Wuerzburg, Germany;
  • Department of Physiology Louisiana State University, Health Sciences Center Shreveport LA, USA;
  • Institute for Vascular Signaling, University of Frankfurt, Frankfurt, Germany;
  • Centre of Pharmacology and Toxicology, Hannover Medical School, 30623 Hannover, Germany;
  • Leibniz-Institut für Analytische Wissenschaften-ISAS-e.V., Dortmund, Germany.

 Педагогическая деятельность

Гамбарян Степан Петровичпрофессор СПБГУ, Специальные семинары для магистров и бакалавров кафедры цитологии и гистологии СПБГУ (2015-2016)

Elena Senchenkova – Cardiovascular Physiology lectures for students enrolled in Physiology course for allied health professionals, Department of Molecular and Cellular Physiology, Louisiana State UniversityHealth Science Center, Shreveport, LA, USA (2011, 2013-2015)

Гранты (за последние 5 лет)

  1. «Сценарии гибели эритроцитов человека: условия формирования микрочастиц».РФФИ. 16-04-00632 А. 2016-2018.
  2. «Исследование механизмов апоптоза безъядерных клеток: тромбоцитов и эритроцитов» Программа Отделения физиологии и фундаментальной медицины РА

Избранные публикации

Hanff E, Bohmer A, Zinke M, Gambaryan S, Schwarz A, Supuran CT, Tsikas D. Carbonic anhydrases are producers of S-nitrosothiols from inorganic nitrite and modulators of soluble guanylyl cyclase in human platelets / Amino Acids 48(7): 1695-1706, 2016.

 Benz PM, Laban H, Zink J, Gunther L, Walter U, Gambaryan S, K Dib. Vasodilator-Stimulated Phosphoprotein (VASP)-dependent and -independent pathways regulate thrombin-induced activation of Rap1b in platelets / Cell Commun Signal 14(1): 21, 2016.

Gründemann D., Gorbulev V., Gambaryan S., Veyhl M., Koepsell H. Drug excretion mediated by a new prototype of polyspecific transporter. 1994. Nature. 372: 549 - 552. PMID: 7990927

Gambaryan S., Butt E., Marcus K., Glazova M., Palmetshofer A., Guillon G., Smolenski A. cGMP dependent protein kinase type II regulates basal level of aldosterone secretion from zona glomerulosa cells without activating StAR gene expression. 2003. J. Biol. Chem. 278: 29640- 29648. PMID: 12775716

Gambaryan S, Geiger J, Schwarz UR, Butt E, Begonja A, Obergfell A, Walter U. Potent inhibition of human platelets by cGMP analogs independent of cGMP-dependent protein kinase. 2004. Blood. 103: 2593 – 2600. PMID: 14644996

Walter U, Gambaryan S. Roles of cGMP/cGMP-dependent protein kinase in platelet activation. 2004.  Blood. 104:2609. PMID: 15466167

Nikolaev VO, Gambaryan S, Engelhardt S, Walter U, Lohse MJ. Real-time monitoring of live cells PDE2 activity: Hormone-stimulated cAMP hydrolysis is faster than hormone-stimulated cAMP synthesis. 2005. J. Biol. Chem. 280: 1716 – 1719. PMID: 15557342

Begonja A, Gambaryan S, Geiger J, Aktas B, Pozgajova M, Nieswandt B, Walter U. Platelet NAD(P)H oxidase-generated ROS production regulates αIIbβ3 integrin activation independent of the NO/cGMP pathway. 2005.  Blood. 106: 2757-2760. PMID: 15976180

Nikolaev VO, Gambaryan S, Lohse MJ. Fluorescent sensors for rapid monitoring of intracellular cGMP. 2006. Nat Methods. 3 (1):23-25. PMID: 16369548

Gambaryan S, Kobsar A, Hartmann S, Birschmann I, Kuhlencordt PJ, Müller-Esterl W, Lohmann SM, Walter U. NO-synthase- /NO-independent regulation of human and murine platelet soluble guanylyl cyclase activity. 2008. J. Thromb. Haemost. 6: 1376 – 1384. PMID: 18485089

Rukoyatkina N, Begonja AJ, Geiger J, Eigenthaler M, Walter U, Gambaryan S. Phosphatidylserine surface expression and integrin alphaIIbbeta3 activity on thrombin/convulxin stimulated platelets/particles of different sizes. 2009. Br. J. Haematol. 144: 591 – 602. PMID: 19036116

Kuhn M, Völker K, Schwarz K, Carbajo-Lozoya J, Flögel U, Jacoby C, Stypmann J, van Eickels M, Gambaryan S, Hartmann M, Werner M, Wieland T, Schrader J, Baba HA. The natriuretic peptide / guanylyl cyclase-A system functions as a stress-responsive regulator of angiogenesis in mice. 2009. J. Clin. Invest. 119: 2019-2030. PMID: 19487812

Gambaryan S, Kobsar A, Rukoyatkina N, Herterich S, Geiger J, Smolenski A, Lohmann SM, Walter U. Thrombin and collagen induce a feedback inhibitory signaling pathway in platelets involving dissociation of the catalytic subunit of PKA from an NF-κB-IκB complex. 2010. J. Biol. Chem. 285: 18352 – 18363. PMID: 20356841

Nikitina ER1Mikhailov AVNikandrova ESFrolova EVFadeev AVShman VVShilova VYTapilskaya NIShapiro JIFedorova OVBagrov AY. In preeclampsia endogenous cardiotonic steroids induce vascular fibrosis and impair relaxation of umbilical arteries. J Hypertens. 2011 Apr;29(4):769-76. PMID: 21330936

Kolmakova EV1Haller STKennedy DJIsachkina ANBudny GVFrolova EVPiecha GNikitina ERMalhotra DFedorova OVShapiro JI,Bagrov AY.

Endogenous cardiotonic steroids in chronic renal failure. Nephrol Dial Transplant. 2011 Sep;26(9): 2912-9. PMID: 21292813

 Gavins FN, Russell J, Senchenkova E, De Almeida Paula L, Damazo AS, Esmon CT, Kirchhofer D, Hebbel RP, Granger DN. Mechanisms of enhanced thrombus formation in cerebral microvessels of mice expressing hemoglobin-S. 2011. Blood. 117(15):4125-33. PMID: 21304105

Senchenkova EY, Russell J, Kurmaeva E, Ostanin D, Granger DN. Role of T lymphocytes in angiotensin II-mediated microvascular thrombosis. 2011. Hypertension. 58(5):959-65. PMID: 21911709

Rukoyatkina N, Walter U, Friebe A, Gambaryan S. Differentiation of cGMP-dependent and -independent nitric oxide effects on platelet apoptosis and reactive oxygen species production using platelets lacking soluble guanylyl cyclase. 2011. Thromb. Haemost. 106:922 – 933. PMID: 21800013

Yildirim A, Russell J, Yan LS, Senchenkova EY, Granger DN. Leukocyte-dependent responses of the microvasculature to chronic angiotensin II exposure. 2012. Hypertension. 60(6):1503-9. PMID: 23090770

Kobsar A, Koessler J, Kehrer L, Gambaryan S, Walter U. The thrombin inhibitors, hirudin und Refludan® activate the soluble guanylyl cyclase and the cGMP pathway in washed human platelets. 2012. Thromb Haemost. 107: 521 – 529. PMID: 22234363

Mindukshev I, Gambaryan S, Kehrer L, Schuetz C, Kobsar A, Rukoyatkina N, Nikolaev VO, Krivchenko A, Watson SP, Walter U, Geiger J. Low angle light scattering analysis: a novel quantitative method for functional characterization of human and murine platelet receptors. 2012. Clin Chem Lab Med. 50: 1253 – 1262. (IM and SG equal contribution) PMID: 22149738

Gambaryan S, Friebe A, Walter U. (2012). Does the NO/sGC/cGMP/PKG pathway play a stimulatory role in platelets? Blood. 119: 535 - 536. PMID: 22653960

Gambaryan S, Butt E, Kobsar A, Geiger J, Rukoyatkina N, Parnova R, Nikolaev VO, Walter U. The oligopeptide DT-2 is a specific PKG I inhibitor only in vitro, not in living cells. 2012. Br J Pharmacol. 167:826-838. PMID: 22612416

Burkhart JM, Vaudel M, Gambaryan S, Radau S, Walter U, Martens L, Geiger J, Sickmann A, Zahedi RP. The first comprehensive and quantitative analysis of human platelet protein composition allows the comparative analysis of structural and functional pathways. 2012. Blood. 120: e73-82. PMID: 22869793

Nikolaeva S, Bachteeva V, Fock E, Herterich S, Lavrova E, Borodkina A, Gambaryan S, Parnova R. Frog urinary bladder epithelial cells express TLR4 and respond to bacterial LPS by increase of iNOS expression and L-arginine uptake. 2012. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 303: R1042- R1052. PMID: 23019216

Böhmer A, Niemann J, Schwedhelm KS, Meyer HH, Gambaryan S, Tsikas D. Potential pitfalls with the use of acetoxy (CH(3)COO) drugs in studies on nitric oxide synthase in platelets. 2013. Nitric Oxide. 28: 14 - 16. PMID: 23000842

Yan SL, Russell J, Harris NR, Senchenkova EY, Yildirim A, Granger DN. Platelet abnormalities during colonic inflammation. 2013. Inflamm Bowel Dis. 19(6):1245-53. PMID: 23518812

Senchenkova EY, Komoto S, Russell J, Almeida-Paula LD, Yan LS, Zhang S, Granger DN. Interleukin-6 mediates the platelet abnormalities and thrombogenesis associated with experimental colitis. 2013. Am J Pathol. 183(1):173-81. PMID: 23673000

Begonja AJ, Gambaryan S, Schulze H, Patel-Hett S, Italiano JE Jr, Hartwig JH, Walter U. Differential roles of cAMP and cGMP in megakaryocyte maturation and platelet biogenesis. 2013. Exp Hematol. 41: 91-101. PMID: 22981933

Gambaryan S, Subramanian H , Rukoyatkina N , Herterich S , Walter U. Soluble guanylyl cyclase is the only enzyme responsible for cGMP synthesis in human platelets. 2013. Thromb Haemost 109: 973-975. PMID: 23467662

Subramanian H, Zahedi R, Sickmann A, Walter U, Gambaryan S. Phosphorylation of CalDAG-GEFI by Protein Kinase A prevents Rap1b activation. 2013. J. Thromb. Haemost. 11:1574-1582 PMID: 23611601

Lies B, Groneberg D, Gambaryan S, Friebe A. Lack of effect of ODQ does not exclude cGMP signalling via NO-sensitive guanylyl cyclase. 2013.  Br J Pharmacol. 170: 317-327. PMID: 23763290

Geiger J, Burkhart JM, Gambaryan S, Walter U, Sickmann A, Zahedi RP. Response: platelet transcriptome and proteome-- relation rather than correlation. 2013. Blood. 121:5257-5258. PMID: 23813942

Миндукшев И., Рукояткина Н., Добрылко И., Скверчинская Е., Никитина Е., Кривошлык В.В.,  Гамбарян С.,  Кривченко А. (2013). Особенности апоптоза безъядерных клеток: тромбоцитов и эритроцитов человека. // Рос. физиол. журнал им. И.М.Сеченова.  Т. 99. N 1.  C. 92—110. PMID: 23659060

Benz PM, Merkel CJ, Offner K, Abeßer M, Ullrich M, Fischer T, Bayer B, Wagner H, Gambaryan S, Ursitti JA, Adham IM, Linke WA, Feller SM, Fleming I, Renné T, Frantz S, Unger A, Schuh K. Mena/VASP and αII-Spectrin complexes regulate cytoplasmic actin networks in cardiomyocytes and protect from conduction abnormalities and dilated cardiomyopathy. 2013. Cell Commun Signal. 11(1):56. PMID: 23937664

Rukoyatkina N, Mindukshev I, Walter U, Gambaryan S. Dual role of the p38MAPK/cPLA 2 pathway in the regulation of platelet apoptosis induced by ABT-737 and strong platelet agonists. 2013. Cell Death Dis. 2013;4:e931. PMID: 24263105

Beck F, Geiger J, Gambaryan S, Veit J, Vaudel M, Nollau P, Kohlbacher O, Martens L, Walter U, Sickmann A, Zahedi RP. Time-resolved characterization of cAMP/PKA-dependant signaling reveals that platelet inhibition is a concerted process involving multiple signaling pathways. 2014. Blood. 123:e1-e10. PMID: 24324209

Tang YH, Vital S, Russell J, Seifert H, Senchenkova E, Granger DN. Transient ischemia elicits a sustained enhancement of thrombus development in the cerebral microvasculature: effects of anti-thrombotic therapy. 2014. Exp Neurol. 261:417-23. PMID: 25058045

Chen W, Thielmann I, Gupta S, Subramanian H, Stegner D, van Kruchten R, Dietrich A, Gambaryan S, Heemskerk JW, Hermanns HM, Nieswandt B, Braun A. Orai1-induced store-operated calcium entry enhances phospholipase activity and modulates TRPC6 function in murine platelets. 2014. J Thromb Haemost. 12: 528-539. PMID: 24520961

Burkhart JM, Gambaryan S, Watson SP, Jurk K, Walter U, Sickmann A,. Heemskerk JWM, Zahedi RP. What Can Proteomics Tell Us About Platelets? 2014. Circ Res. 114:1204-1219. PMID: 24677239

Navdaev A, Subramanian H, Petunin A, Clemetson KJ, Gambaryan S, Walter U. Echicetin Coated Polystyrene Beads: A Novel Tool to Investigate GPIb-Specific Platelet Activation and Aggregation. 2014. PLoS One. 9: e93569. PMID: 24705415

Mischnik M, Gambaryan S, Subramanian H, Geiger J, Schütz C, Timmer J, Dandekar T. A comparative analysis of the bistability switch for platelet aggregation by logic ODE based dynamical modeling. 2014. Mol Biosyst. 10:2082-2089. PMID: 24852796

Böhmer A, Gambaryan S, Flentje M, Jordan J, Tsikas D. [ureido-15N] Citrulline UPLC-MS/MS nitric oxide synthase (NOS) activity assay: Development, validation, and applications to assess NOS uncoupling and human platelets NOS activity. 2014. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 965C:173-182. PMID: 25033468

Böhmer A, Gambaryan S, Tsikas D. Human blood platelets lack nitric oxide synthase activity. 2015. Platelets. 26:583-588. PMID: 25360996

Souza DG, Senchenkova EY, Russell J, Granger DN. MyD88 mediates the protective effects of probiotics against the arteriolar thrombosis and leukocyte recruitment associated with experimental colitis. 2015. Inflamm Bowel Dis. 21(4):888-900. PMID: 25738377

Senchenkova E, Seifert H, Granger DN. Hypercoagulability and Platelet Abnormalities in Inflammatory Bowel Disease. 2015. Semin Thromb Hemost. 41(6):582-9. PMID: 26270113

Sharina IG, Sobolevsky M, Papakyriakou A, Rukoyatkina N, Spyroulias GA, Gambaryan S, Martin E. The fibrate gemfibrozil is an NO - and heme-independent activator of soluble guanylyl cyclase: in vitro studies. 2015. Br J Pharmacol. 172: 2316-2329. PMID: 25536881

Gambaryan S, Tsikas D. A review and discussion of platelet nitric oxide and nitric oxide synthase: do blood platelets produce nitric oxide from L-arginine or nitrite? 2015. Amino Acids 47:1779-1793. PMID: 25929585

Reiss C, Mindukshev I, Bischoff V, Subramanian H, Kehrer L, Friebe A, Stasch JP, Gambaryan S, Walter U. The sGC stimulator Riociguat inhibits platelet function in washed platelets but not in whole blood. 2015. Br J Pharmacol. 172: 5199 - 5210. PMID: 26282717

Nagy Z., Wynne K., von Kriegsheim A., Gambaryan S., Smolenski A. Cyclic Nucleotide-dependent Protein Kinases Target ARHGAP17 and ARHGEF6 Complexes in Platelets. 2015. J Biol Chem. 290: 29974-29983. PMID: 26507661

Hanff E, Böhmer A, Zinke M, Gambaryan S, Schwarz A, Supuran CT, Tsikas D. Carbonic anhydrases are producers of S-nitrosothiols from inorganic nitrite and modulators of soluble guanylyl cyclase in human platelets. 2016. Amino Acids. 48(7):1695-706. PMID: 27129464

Rukoyatkina N.I., Mindukshev I.V., Sudnitcyna Yu. S., Balljuzek M.F., Krivchenko A.I., Gambaryan S.P. COMPARISON OF PLATELET APOPTOSIS INDUCED BY BCL-2 INHIBITOR AND PLATELET ACTIVATORS. 2016. Neuroscience and Behavioral Physiology - Sechenov Physiology Journal. 102(1): 78-88.

Yildirim A, Senchenkova E, Granger DN. Hypercholesterolemia blunts the oxidative stress elicited by hypertension in venules through angiotensin II type-2 receptors. 2016. Microvasc Res. 105:54-60.  PMID: 26775070

Миндукшев Игорь Викторович д.б.н., зав. лаб

заведующий лабораторией

Гамбарян Степан Петрович, д.б.н

главный научный сотрудник

Рукояткина Наталия Ильинична к.б.н.

старший научный сотрудник

Скверчинская Елизавета Арнольдовна к.б.н.

старший научный сотрудник

Судницына Юлия Станиславовна, к.б.н.

научный сотрудник

Андреева Александра Юрьевна, к.б.н.

научный сотрудник

Шпакова Валентина Сергеевна, аспирант

младший научный сотрудник

Добрылко Ирина Анатольевна

младший научный сотрудник

Воронцов Игорь Алексеевич

ведущий инженер

Демченко Иван Тимофеевич, д.б.н., профессор

главный научный сотрудник

Алексеева Ольга Сергеевна , к.б.н.

Ведущий научный сотрудник

Жиляев Cергей Юрьевич к.б.н

старший научный сотрудник

Платонова Татьяна Федоровна

старший лаборант с высшим образованием